液相色譜填料的分離機理是基于混合物中各組分對兩相親和力的差別。根據(jù)液相色譜填料的不同,液相色譜分為液固色譜、液液色譜和鍵合相色譜。
液相色譜填料可考慮用于制備HPLC中,但制備色譜由于填料使用量大,故對填料尤其是用于大規(guī)模工業(yè)化色譜中的填料有其特殊的要求。
液相色譜填料高的機械強度
液相色譜填料在填充及用于目標產(chǎn)物的分離純化中,始終承受很大的機械壓力,而且在工業(yè)生產(chǎn)特別是制藥業(yè)中,一根DAC色譜柱裝置常用于分離與純化多種藥物,然而一種填料往往于一種產(chǎn)品。因此,對不同藥物采用不同的純化流程時,柱中原有的填料必須壓出,填充其他合適的填料,而壓出后的填料仍需保留備用。所以對填料的機械強度要求通常比分析用的填料更高,以便反復使用。機械性能差的填料經(jīng)受不住反復填充,它們易破碎,產(chǎn)生細顆粒,降低柱滲透性,甚至堵塞濾片,造成流速分布不均勻,影響分離產(chǎn)物的純度,zui終在系統(tǒng)中產(chǎn)生*的柱壓,無法繼續(xù)使用。因此填料的機械強度是一項極重要的質(zhì)量指標,關(guān)系到填料的壽命和生產(chǎn)的*運行。
液相色譜填料高負載量
在制備和工業(yè)流程規(guī)模的色譜中,液相色譜填料的負載量是另一項極重要的因素,負載量越大,則單位重量填料可處理的原料量就可增加,因而提高了產(chǎn)率。負載量與比表面積、孔徑大小、孔徑大小的分布及表面官能團的密度等參數(shù)有關(guān)。在填料的設計與制備過程中將這些參數(shù)優(yōu)化后,就可使單位重量固定相中的有效表面積zui大。隨著孔徑增大,單位重量填料的比表面(SSA)減小,故單位重量填料的樣品吸附量AC(mg/g)也隨之減小,但孔徑100?的卻比70?的AC(mg/g)要大,這說明孔徑70?的填料中,有相當一部分小孔溶菌酶分子無法進入,因而它們的比表面是無效的;而在100?的填料中,溶菌酶分子能擴散進入的小孔要比70?的填料中多得多,故有效比表面比70?的大,所以AC(mg/g)也隨之增大,這也說明了為什么單位面積的吸附量AC(mg/m2)隨孔徑增大而增大。因為大孔填料中的表面積多數(shù)為目標產(chǎn)物的有效表面積,所以應該說影響負載量的不是填料的比表面,而是填料對目標產(chǎn)物分子的有效表面積。因此對不同的目標產(chǎn)物,隨著其分子大小及物化性質(zhì)的不同,選擇合適孔徑及孔徑分布的填料是獲得高負載量的一個關(guān)鍵因素。